UV 法含量測定會把在某一波長處有吸收的所有成分都計入。HPLC 法則先把各化合物分離開,再只計入方法所指定的那些。兩種數值回答的是不同的問題。
收到兩份報價,對應的似乎是同一種萃取物。一份用 UV 法標明活性成分含量,另一份用 HPLC 法,而且 UV 的數值明顯更高。兩份報價都未必有錯,所用原料甚至可能是同一種。原因在於兩種方法計的是不同的東西,而且各自都以某一指定物質來表示結果。
在比較兩個含量測定數值之前,或在把檢測報告與您自己實驗室的結果相比較之前,可做以下六項核對。文中依據的是歐洲草藥藥品指引、分析方法確效的國際指引以及已發表的研究;示例取自我們自己的規格。我們此前的文章講的是規格、萃取比例、檢測報告(COA)、溶劑和載體,以及污染物各行;本文只談含量測定方法。
01 / 測定方法
含量測定一行寫明方法了嗎?
含量測定數值離不開得出它的那種方法。歐洲草藥藥品指引把這一點寫進了規格的定義,即「一份試驗清單、對分析方法和生物學方法的引用,以及適當的允收標準」;而符合規格,則是指物料「按所列分析方法檢驗時,將符合所列允收標準」。1
在規格上,方法往往就是數值後面的一個簡短詞語:UV、HPLC 或其他技術。沒有這個詞語的一行是不完整的。2023 年一篇由 American Botanical Council 及合作機構的作者撰寫的綜論指出,分光光度法含量測定的結果「有時是檢測報告上提供的、關於植物原料化學組成的唯一數據」;該綜論還補充說,說明定量結果所依據的方法「應成為行業標準做法」。2
核對: 含量測定一行是否寫明了方法,以及規格、報價和檢測報告寫明的是否為同一種方法。
02 / UV
UV 數值計入的是什麼?
在規格上,UV 指紫外-可見分光光度法。先將萃取物溶解;在許多含量測定中,還要用試劑使目標化合物生成有色產物;然後測定溶液在某一波長處吸收的光。溶液中的各化合物並未相互分離,所以凡是在該波長處有吸收的成分,都會計入結果。2
該綜論指出了由此帶來的後果:分光光度法得到的濃度「往往高於其他定量方法的結果,原因是在目標波長處有吸收的非目標分析物造成干擾」。它舉的例子是水飛薊萃取物,其中水飛薊素濃度「用 HPLC-UV 法測定一般在 30% 至 65% 之間,用分光光度法測試則為 65–80%」。2
分析方法確效指引為這一特性給出了名稱。專屬性和選擇性描述的是「其他物質干擾分析物測定的程度」。3 歐洲草藥藥品指引所舉的非專屬性含量測定的例子,就是紫外-可見分光光度法含量測定。1 因此,UV 數值是一類化合物的合計數值,應當按此來理解。
核對: UV 數值意在計入哪一類化合物,以及方法所用的試劑和波長。
03 / HPLC
HPLC 數值計入的是什麼?
HPLC 即高效液相層析法,它在進行任何測定之前,先把溶解後的萃取物分離成各個化合物。隨後,各化合物以各自獨立的峰出現,方法計入的是它所指定的那些峰。層析管柱之後的偵測器通常也是靠光來測量:該綜論稱 UV/vis 偵測器為「使用最廣泛的檢測系統」。2 兩種方法的主要差別在於分離這一步。
因此,HPLC 數值代表的是方法所指定的化合物,可以是一種,也可以是幾種相加,規格應當寫明是哪些化合物。歐洲藥品管理局關於山桑子的報告就是一例。報告引述了《歐洲藥典》對山桑子鮮果精製標準化乾萃取物的定義:花青素含量 32.4% 至 39.6%,「以氯化矢車菊素-3-O-葡萄糖苷表示」。按報告所列,該含量測定的層析圖顯示二十個指定的峰:十五種花青素和五種花色素,後者即花青素不含糖基的形式。4
方法沒有指定的化合物不被計入,無論萃取物中含有多少。此外,有些類別只能部分分離:對於前花青素,綜論指出,較大分子的分離「用層析手段很困難;因此供應商通常採用分光光度法進行定量分析」。2
核對: HPLC 數值所計入的化合物,以及該數值是這些化合物之和,還是某一種指定化合物的含量。
04 / 對照標準品
以哪種對照標準品為準,結果又以什麼表示?
在含量測定中,兩種方法都不能直接從樣品上讀出一個百分數。儀器訊號是參照某一指定物質換算成含量的,該物質要麼作為對照標準品同時測定,要麼已納入計算之中;在歐洲指引中,對照標準品用於「鑑別和純度檢驗以及含量賦值」。1 結果隨後以某一指定物質或某一類物質來表述。草藥物質和製劑標示指引給出了措辭:番瀉葉中的羥基蒽苷「以番瀉苷 B 計」;銀杏葉萃取物中的類黃酮「以黃酮苷表示」。5 寫明的物質不一定就是實際測得的物質:銀杏的藥典方法通常是在酸水解之後測定類黃酮,酸水解會使其糖基脫落。2
更換對照標準品,數值就會變化,儘管方法和原料都沒有變。用顯色反應(即 DMAC 法)測定蔓越莓前花青素時,有一項研究報告說,以蔓越莓本身製備的對照標準品「所得數值是以前花青素 A2 測定的數值的 2.2 倍」。6
分子的形式同樣重要。山桑子報告用兩個數字描述同一種萃取物,即「36% 花色苷,相當於 25% 花色素」:第二個數字計的是同樣的分子,但不含其糖基部分。4
我們的蔓越莓萃取物就是一例:其含量測定表述既寫明了方法,也寫明了對照標準品。其規格為總可溶性前花青素(PACs)含量 30% 及以上,採用 BL-DMAC / UV-Vis 法檢測,結果以前花青素 A2 當量表示。該方法以前花青素 A2 為對照標準品,在 640 nm 處測定吸光度;結果並不代表分離所得 A 型 PAC 的純度。採用不同分析方法或校準對照標準品所得的結果,並不能直接比較。
核對: 所用的對照標準品,以及結果以什麼表示:某一種指定化合物、一類化合物,或是帶糖基或不帶糖基的分子。
05 / 方法的選擇
哪種方法適合您需要的數值?
HPLC 並非在任何情況下都是更好的方法。確效指引說明了確效任何一種方法都必須證明什麼:「分析方法適合其預期用途」。3 如果指標成分是一種或少數幾種化合物,能將其分離的方法可以直接測定這些化合物。如果指標成分是層析無法分離的一整類化合物,通常就用總量測定。2
一項關於蔓越莓 DMAC 含量測定的多實驗室研究,稱其為「用於測定蔓越莓樣品中總 PACs 的一種簡單、穩健且相對專屬的分光光度法」,並補充說它「可能不適合用於比較不同食品類型的濃度」。7
總量測定無法顯示這些化合物來自何處:就用於前花青素的顯色反應而言,綜論指出,沒有一種「能夠區分不同來源的 PACs」。2 歐洲草藥藥品指引主張,只要可行,就優先採用專屬性方法;如有正當理由採用非專屬性含量測定,指引則指出可藉助第二項試驗:「可將含量測定與適當的鑑別試驗(例如層析指紋圖譜)結合使用」。1 確效指引對此作了一般性的表述:專屬性不足「應由一種或多種其他輔助分析方法來補充,除非有適當理由」。3
核對: 方法是否適合該指標成分;採用總量測定時,與之並用的是哪一種鑑別試驗。
06 / 您的實驗室
您自己的檢測會採用同一種方法嗎?
一個數值只能用得出它的那種方法來確認。如果您的實驗室用 HPLC 法檢測所交貨物,而規格是按 UV 法制定的,那麼檢測結果就不是對照該規格得出的結果,無論結果偏低還是偏高。兩種數值之間沒有通用的換算係數:差距取決於萃取物中還含有什麼,以及每個結果是如何表示的。
即使用同一種方法,兩家實驗室也不會得出同樣的數字。在這項多實驗室研究中,五家實驗室用同一種 DMAC 法分析了同樣的十一個蔓越莓樣品。以相對標準偏差計,同一實驗室內的結果平均相差 4.1%,不同實驗室之間平均相差 16.9%(範圍為 8% 至 32%)。7
因此,下單之前要先確定三件事:方法,即寫明方法名稱並引用某部藥典或書面程序;對照標準品;以及雙方都能接受的、兩家實驗室結果之間的差異。對於有藥典專論的藥品,歐洲指引說明了在使用了其他方法時以哪種方法為準:「如有疑問或爭議,以藥典的分析方法為準。」1 沒有適用的藥典方法時,就要由商定的規格來起這個作用。我們關於檢測報告(COA)的文章,講了收到檢測報告時應做的核對。
核對: 您的實驗室與為該檢測報告做檢測的實驗室,所用的是否為同一種方法、同一種對照標準品,以及雙方能接受兩者結果之間有多大差異。
需要提供的資訊
詢價時請說明測定方法
當含量測定數值對您的產品很重要時,請告知我們:
- 原料名稱,如有多個使用部位可選,請一併註明所需部位;
- 您的預期用途和目標市場;
- 您需要的化合物或化合物類別,以及目標含量;
- 您的品質團隊所採用的測定方法,以及對照標準品(若測定方法涉及對照標準品);
- 您是否會自行檢測所交貨物,以及採用哪種方法;
- 您需要哪些技術文件,例如規格書或檢測報告(COA);
- 您的姓名、公司和聯絡方式。
活性成分的百分含量與檢測方法、對照標準品相對應,才能更準確地描述原料。請將這些要求與目標含量一併告訴我們,以便規格和報價準確對應您的專案需求。產品型錄所列規格範圍僅供參考,可行性、供應情況和價格隨報價確認。
產品示例取自 YOHOLIFE® 的規格和技術文件。本文不提供我們原料的其他含量測定數值;所選規格的測定方法和規格書,將在您詢價時確認。資料來源 1、3、4 和 5 是為藥品撰寫的,此處引用其定義和示例;資料來源 2 是對已發表研究的綜論;資料來源 6 和 7 是針對同一種蔓越莓含量測定方法的研究,本文僅參閱了其已發表的摘要。所引資料已於 2026 年 11 月 12 日核對。